Netrvalo to dlho, nechal som sa nahovoriť...šiel som na katedru a spýtal sa, boli radi, mikrobiológia a virológia nie je vyhľadávaný odbor pre študenta a určite nie na to, aby sa človek zahrabal už v druhom ročníku do "labáku". V tom čase boli "in" klinické disciplíny, ale nikto nechcel byť predklinickou laboratórnou myšou. Zdalo sa mi to celkom zaujímavé a určite som sa ešte necítil na klinické disciplíny, vzhľadom k tomu, že som tomu, až tak nerozumel (bol som len druhák) a "trapošiť" pri pacientovi, len preto aby som sa mohol chvastať, že robím "niečo" na klinickej disciplíne (to už je jedno akej).
...tak som zaklopal...
Ujala sa ma Doc. MVDr. Ľudmila Tkáčiková, PhD. zlatá to žena, nedám na ňu dopustiť, pedagóg srdcom a dušou. Mala so mnou celkom trpezlivosť, tak sme sa hneď pustili do práce :-))
Začali sme s "light" témou...
Testovanie intragenerickej inhibície rastu Salmonella enteritidis
Intragenerická inhibícia rastu bola pozorovaná medzi kmeňmi salmonel, citrobakter a E. coli. Pri testovaní schopností rôznych kmeňov Salmonella typhimurium kolonizovať črevo experimentálne infikovaných kurčiat, sa pozorovalo, že kolonizácia tráviaceho traktu novonarodených kurčiat jedným kmeňom salmonel navodí značný stupeň rezistencie oproti kmeňu druhému.
Tento jav bol následne skúmaný, ako potencionálna metóda umožňujúca zabrániť kolonizácii tráviaceho traktu kurčiat rozličnými sérotypmi salmonel pomocou prekolonizácie tráviaceho traktu kurčiat pre človeka a kurčatá nevirulentným mutantom salmonely.
Bolo zistené, že in vivo (v živom organizme) pozorovaná inhibícia kolonizácie medzi kmeňmi salmonel bola druhovo špecifická. Nebola zapríčinená mŕtvymi baktériami, alebo imunitou či baktériofágmi. Podobný jav bol zaznamenaný in vitro (laboratórne podmienky) v zmiešaných bujónových kultúrach. V prípade 24 hodinnovej bujónovej kultúry, niektoré kmene salmonel úplne inhibovali rozmnožovanie neskôr inokulovaného kmeňa salmonel, zatiaľ čo kultúry iných baktérií (napr. E. coli, Citrobakter) neinhibovali rast druhého kmeňa salmonel. Avšak mechanizmy zapríčiňujúce úplnú inhibíciu rozmnožovania, vyskytujúce sa medzi kmeňmi salmonel v bujóne nie sú známe.
Náš cieľ bolo testovať kmene vybraných salmonel skupiny S. enteritidis a navodiť intragenerickú inhibíciu rastu a zároveň otestovať vplyv počtu baktérií na samotnú inhibíciu rastu salmonel.
- kmene S. enteritidis 117, 208, 220, 280 boli izolované z hydiny, z týchto kmeňov sme si pripravili nalidixín rezistentné mutanty (NxR )
- živné médiá: BHI bujón bez nalidixínu (Nx) a s Nx, Endo agar s Nx
...potom som sa celé dni a celé víkendy babral s kolóniami salmonel asnáď 1000x som sa spýtal seba samého..."čo tu! vlastne do čerta Dávidrobíš!!!"...
- testoval som intragenerickú inhibíciu salmonel, pripravoval som si rôzne riedenia "do aleluja" aby so potom zistil, že na tie "blbé" salmonely musím ísť inak...a tak som strávil nejednú bezsennú noc s myšlienkami, ako mi dopadne "to a to" riedenie po 24 hod. inkubácii...
...boli to fajn zážitky, keď mi začali vychádzať prvé veci tak "ako by mali" a neľutujem, že som sa stal laboratórnou krysou, aj napriek tvrdeniu "čím ďalej do lesa zájdeš, tým je tam viac stromov"...problematika ma začala neskutočne baviť...
Istí páni Berchieri a Barrow (1991) sledovali vznik intragenerickej inhibície rastu medzi kmeňmi S. typhimurium, pričom uvádzali, že k tomu, aby došlo k vzniku tohoto fenoménu je potrebné, aby tzv. majoritný kmeň bol v stacionárnej fáze rastu (24 h. kultúra) a v koncentrácii vyššej než 104 cfu.ml-1 .
K podobným záverom sme došli aj my. Pri testovaní vplyvu spomínaných 4 kmeňov S. enteritidis na rast iných nalidixín rezistentných S. enteritidis sme pozorovali rozdielnu schopnosť inhibovať rast týchto salmonel.
Doposiaľ však nie je známe, ktoré faktory ovplyvňujú vznik intragenerickej inhibície rastu. Na vznik tohoto fenoménu nemá vplyv použitie NxR mutantov, ani sekrécia extracelulárnych substancií pretože supernatanty použitých kultúr nemali inhibičný účinok. Nedostatok živín tiež nemal vplyv na rast minoritného kmeňa salmonel, lebo pokusy dokázali, že aj po prípadnej centrifugácii a filtrácii bujónových kultúr (odstránenie baktérií) takéto bujóny umožňovali dostatočný rast salmonel.
Jednou z alternatívnych možností vysvetlenia vzniku tejto inhibície je priamy fyzický kontakt medzi jednotlivými bunkami a prítomnosť určitých, doposiaľ nedefinovaných povrchových proteínov.
...možno sa niečo zmenilo...odvtedy prešlo už 8 rokov...
...a tak som na mikrobiológii strávil tri roky :-))...
dv
